CHO細胞

CHO細胞是中國倉鼠卵巢細胞，1957年美國科羅拉多大學Dr.Theodore T.Puck從一成年雌性倉鼠卵巢分離獲得，是生物工程上廣泛使用的細胞系。分子生物學、分子免疫學等學科的發展使基因工程具有越來越重要的地位。在基因工程研究的動物細胞表達系統中，最具代表性的就是中國倉鼠卵巢細胞(ChineseHamster Ovary,CHO)。它是用來表達外源蛋白最多也最成功的一類細胞。

CHO細胞表達體系

CHO細胞屬于成纖維細胞，屬于成纖維細胞，可貼壁培養，經多次傳代篩選后也可懸浮培養。CHO細胞是一種非分泌細胞，本身很少分泌內源蛋白，因此對目標蛋白分離純化十分有利；形成有活性二聚體，具有糖基化功能，是表達復雜生物大分子的理想宿主；具有不死性，可傳百代以上，是生物工程廣泛使用的細胞系。CHO細胞培養可在人工控制條件的生物反應器中大規模培養；比微生物細胞更大，無細胞壁，機械強度較低，對剪切力敏感，環境適應能力差；配增時間長，生長緩慢，易受微生物污染；培養過程中細胞相互粘連以集群形式存在培養過程需氧量少，代謝產物具有生物活性，生產成本高。

重組蛋白

基因工程藥物研發的主要環節有基因的克隆和基因工程菌的構造、重組細胞的培養、目的產物的分離純化等。針對這些主要環節，研究人員正致力于高效表達、培養工藝及下游分離純化等方面的研究。隨著基因工程技術的不斷發展，目前已有多種表達系統可用于生產具有醫療價值的人或動物來源的蛋白質。大腸桿菌(E.coli)是使用最早的表達系統，其顯著優點是易于操作，產量高，成本低。但由于用E.coli生產的蛋白質藥物因缺乏糖基化而在人體內易被降解，因此它的藥放大大降低。此外，它還存在易產生內毒素和包涵體的問題。真核細胞中CHO細胞是目前重組糖基蛋白生產的首選體系；因為與其他表達系統相比，它具有許多優點：①具有準確的轉錄后修飾功能，表達的蛋白在分子結構、理化特性和生物學功能方面最接近于天然蛋白分子。②具具有產物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的內源蛋白，便于下游產物分離純化。③具有重組基因的高效擴增和表達能力，外源蛋白的整合穩定。④具有貼壁生長特性，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力，可以進行懸浮培養，表達水平較高。⑤CHO細胞屬于成纖維細胞(fibroblast),很少分泌自身的內源蛋白，利于外源蛋白的啟分離。⑥能以懸浮培養方式或在無血清培養基中達到高密度培養。且培養體積能達到1000L以上，可以大規模生產。

應用方案

通過高壓細胞破碎儀使物料在柱塞作用下進入可調節壓力大小的閥組中經過特定寬度的限流縫隙均質區在均質閥內產生三種效應:空穴效應、撞擊效應、剪切效應的機械作用力從而打破細胞壁的束縛，把蛋白質從組織或細胞中釋放出來盡可能保持原來的天然狀態，不喪失活性，達到高效率破碎細胞的效果。即使用高壓勻漿破碎法采用高壓細胞破碎法，在細胞內產生的壓力效應，從而能夠有效地提取出蛋白質，且處理量大、破碎速度較快。這是一種機械處理細胞，物理抽提方法。

解決方案

首先富集菌體，收集胞內產物的細胞或菌體。然后進行細胞重懸，用適當的緩沖液或培養液將離心或沉降等方法得到的固體（沉淀、細胞、活性物質等等）重新懸浮。其次進行細胞破碎，使產物轉移到液相中。最后收集含生化物質的液相，進行碎片分離，分離除去細胞、菌體、細胞碎片、蛋白質的沉淀物和絮凝體等固體懸浮物，得到上清液或濾液。然后從澄清的濾液中提取胞內產物，從細胞裂解物中獲取目標產物。

PHD優勢

重組人粒細胞刺激因子（CHO細胞）系由高效表達人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)基因的大腸桿菌，利用基因重組技術經發酵、分離和高度純化后制成。與天然產品相比，生物活性在體內、外基本一致。G-CSF是調節骨髓中粒系造血的主要細胞因子之一，可選擇性地作用于粒系造血祖細胞，促進其增殖、分化，并可增加粒系終末分化細胞即外周血中性粒細胞的數目與功能。

◆破壁能力：高壓設計，輕松上壓；均質效率高，工藝穩定；穩定的破碎能力，更高的胞內物提取；純機械破碎，無化學污染；可放大工業化生產工藝設備

◆控溫效果：獨特溫控設計，內置和外置雙向控溫，確保均質過程及出料溫度可控。

◆活性保障：循環的控溫系統，蛋白活性不失活，細胞破碎后，活性保值高達99%                                                                 

◆無菌保障：金屬結構連接，沒有O型圈或墊片，無死角設計；在線排空結構設計；所有機型均可實現在線清洗（CIP）、循環清洗、拆裝清洗、在位滅菌（SIP）