應(yīng)用背景

減毒疫苗（或稱減毒活疫苗，LAV）是一種通過降低病原體的毒力但仍保持其活力而產(chǎn)生的疫苗，減毒疫苗可以刺激強(qiáng)烈而有效的持久免疫反應(yīng)。減毒作用是吸收感染因子并改變它，使其變得無(wú)害或毒性降低，鼓勵(lì)身體產(chǎn)生抗體和記憶免疫細(xì)胞，以應(yīng)對(duì)疫苗所針對(duì)的特定病原體。電鏡下輪狀病毒呈二十面對(duì)稱球形顆粒,三層衣殼(外殼、內(nèi)殼、核殼),外型似車輪，故命名為“輪狀病毒”ERotavirus)。1973年由澳大利亞科學(xué)家Bishop首次發(fā)現(xiàn)，人輪狀病毒是嬰幼兒腹瀉最重要的病毒病原。輪狀病毒疫苗是預(yù)防輪狀病毒腸炎的疫苗，輪狀病毒疫苗并非滅活疫苗，而是減毒活疫苗，輪狀病毒疫苗屬于減毒的重組活疫苗。

重組蛋白

20世紀(jì)60年代以后，用細(xì)胞作為病毒培養(yǎng)基質(zhì)制備的狂犬病疫苗逐漸取代了神經(jīng)組織和禽胚疫苗，其中細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)主要有動(dòng)物細(xì)胞(包括原代地鼠腎細(xì)胞、雞胚細(xì)胞及傳代Vero細(xì)胞)和人二倍體細(xì)胞。輪狀病毒屬呼腸孤病毒科，病毒基因組為含11節(jié)段的雙鏈RNA。主要結(jié)構(gòu)蛋白為(外殼VP4和VP7,內(nèi)殼VP6)。人和動(dòng)物輪狀病毒的VP6具有相同的抗原性，且動(dòng)物毒株比人RV毒株易于在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)，且對(duì)人天然減毒。這是研究輪狀病毒減毒活疫苗的研制理論基礎(chǔ)。工業(yè)上常常用哺乳動(dòng)物細(xì)胞作為病毒培養(yǎng)基質(zhì)，已注冊(cè)輪狀病毒疫苗有減毒羊輪狀病毒株疫苗(蘭州生物制品研究所，中國(guó))、減毒人輪狀病毒株疫苗(GSK)、基因重配5價(jià)牛株輪狀病毒疫苗(Merk)。

應(yīng)用方案

通過高壓細(xì)胞破碎儀使物料在柱塞作用下進(jìn)入可調(diào)節(jié)壓力大小的閥組中經(jīng)過特定寬度的限流縫隙均質(zhì)區(qū)在均質(zhì)閥內(nèi)產(chǎn)生三種效應(yīng):空穴效應(yīng)、撞擊效應(yīng)、剪切效應(yīng)的機(jī)械作用力從而打破細(xì)胞壁的束縛，把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來(lái)盡可能保持原來(lái)的天然狀態(tài)，不喪失活性，達(dá)到高效率破碎細(xì)胞的效果。即使用高壓勻漿破碎法采用高壓細(xì)胞破碎法，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的壓力效應(yīng)，從而能夠有效地提取出蛋白質(zhì)，且處理量大、破碎速度較快。這是一種機(jī)械處理細(xì)胞，物理抽提方法。

解決方案-破壁

首先將病原細(xì)菌進(jìn)行病原菌培養(yǎng)形成菌體發(fā)酵液或?qū)⒉《痉湃爰?xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成細(xì)胞培養(yǎng)液，進(jìn)行懸浮培養(yǎng)合成抗原物質(zhì)。接著通過沉降、離心、過濾等方式進(jìn)行固液分離，對(duì)生物工程產(chǎn)物進(jìn)行預(yù)處理。然后通過高壓細(xì)胞破碎儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物得到細(xì)胞提取液，初步提取目標(biāo)產(chǎn)物。最后收集純化制備抗原。

解決方案-純化

在生產(chǎn)輪狀病毒疫苗的時(shí)候，需要大量培養(yǎng)的細(xì)胞，讓它們?nèi)旧喜≡w，經(jīng)過培養(yǎng)，繁殖出大量病毒，滅活以后做為抗原，注射到人體里。在這個(gè)過程中，需要用到Minnebio? 超活核酸酶Ultra-active Nuclease。細(xì)胞在培養(yǎng)過程中，殘留下大量DNA是非常危險(xiǎn)的，可以滲透到人的細(xì)胞里造成各種各樣的遺傳疾病，像是畸形，癌癥等。因此在疫苗的生產(chǎn)過程中必須去除殘留的DNA，各國(guó)對(duì)此都有嚴(yán)格的規(guī)定，Minnebio? 超活核酸酶Ultra-active Nuclease是首選核酸酶，因?yàn)樗鼜V譜，高效。它比傳統(tǒng)使用的核酸酶DNAase活性高10倍左右，速度快15倍左右。

PhD優(yōu)勢(shì)

高壓均質(zhì)法是工業(yè)上常用的破碎細(xì)胞的方法之一，屬于物理破碎細(xì)胞的方法。輪狀病毒疫苗原液生產(chǎn)使用均質(zhì)機(jī)處理輪狀病毒收獲液破碎細(xì)胞釋放病毒的工藝，該設(shè)備在病毒感染細(xì)胞收獲后，用于處理感染細(xì)胞，使之破碎釋放病毒，用于后續(xù)工藝生產(chǎn)。工業(yè)上常常用哺乳動(dòng)物細(xì)胞作為病毒培養(yǎng)基質(zhì)制備輪狀病毒疫苗，常見壓力在0～1000bar左右。

◆破壁能力：高壓設(shè)計(jì)，輕松上壓；均質(zhì)效率高，工藝穩(wěn)定；穩(wěn)定的破碎能力，更高的胞內(nèi)物提取；純機(jī)械破碎，無(wú)化學(xué)污染；可放大工業(yè)化生產(chǎn)工藝設(shè)備

◆控溫效果：獨(dú)特溫控設(shè)計(jì)，內(nèi)置和外置雙向控溫，確保均質(zhì)過程及出料溫度可控。

◆活性保障：循環(huán)的控溫系統(tǒng)，蛋白活性不失活，細(xì)胞破碎后，活性保值高達(dá)99%                                                                 

◆無(wú)菌保障：金屬結(jié)構(gòu)連接，沒有O型圈或墊片，無(wú)死角設(shè)計(jì)；在線排空結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)；所有機(jī)型均可實(shí)現(xiàn)在線清洗（CIP）、循環(huán)清洗、拆裝清洗、在位滅菌（SIP）