應用背景

減毒疫苗（或稱減毒活疫苗，LAV）是一種通過降低病原體的毒力但仍保持其活力而產生的疫苗，減毒疫苗可以刺激強烈而有效的持久免疫反應。減毒作用是吸收感染因子并改變它，使其變得無害或毒性降低，鼓勵身體產生抗體和記憶免疫細胞，以應對疫苗所針對的特定病原體。電鏡下輪狀病毒呈二十面對稱球形顆粒,三層衣殼(外殼、內殼、核殼),外型似車輪，故命名為“輪狀病毒”ERotavirus)。1973年由澳大利亞科學家Bishop首次發現，人輪狀病毒是嬰幼兒腹瀉最重要的病毒病原。輪狀病毒疫苗是預防輪狀病毒腸炎的疫苗，輪狀病毒疫苗并非滅活疫苗，而是減毒活疫苗，輪狀病毒疫苗屬于減毒的重組活疫苗。

重組蛋白

20世紀60年代以后，用細胞作為病毒培養基質制備的狂犬病疫苗逐漸取代了神經組織和禽胚疫苗，其中細胞培養基質主要有動物細胞(包括原代地鼠腎細胞、雞胚細胞及傳代Vero細胞)和人二倍體細胞。輪狀病毒屬呼腸孤病毒科，病毒基因組為含11節段的雙鏈RNA。主要結構蛋白為(外殼VP4和VP7,內殼VP6)。人和動物輪狀病毒的VP6具有相同的抗原性，且動物毒株比人RV毒株易于在組織培養中生長，且對人天然減毒。這是研究輪狀病毒減毒活疫苗的研制理論基礎。工業上常常用哺乳動物細胞作為病毒培養基質，已注冊輪狀病毒疫苗有減毒羊輪狀病毒株疫苗(蘭州生物制品研究所，中國)、減毒人輪狀病毒株疫苗(GSK)、基因重配5價牛株輪狀病毒疫苗(Merk)。

應用方案

通過高壓細胞破碎儀使物料在柱塞作用下進入可調節壓力大小的閥組中經過特定寬度的限流縫隙均質區在均質閥內產生三種效應:空穴效應、撞擊效應、剪切效應的機械作用力從而打破細胞壁的束縛，把蛋白質從組織或細胞中釋放出來盡可能保持原來的天然狀態，不喪失活性，達到高效率破碎細胞的效果。即使用高壓勻漿破碎法采用高壓細胞破碎法，在細胞內產生的壓力效應，從而能夠有效地提取出蛋白質，且處理量大、破碎速度較快。這是一種機械處理細胞，物理抽提方法。

解決方案-破壁

首先將病原細菌進行病原菌培養形成菌體發酵液或將病毒放入細胞培養基中培養形成細胞培養液，進行懸浮培養合成抗原物質。接著通過沉降、離心、過濾等方式進行固液分離，對生物工程產物進行預處理。然后通過高壓細胞破碎儀對細胞進行破碎，釋放胞內產物得到細胞提取液，初步提取目標產物。最后收集純化制備抗原。

解決方案-純化

在生產輪狀病毒疫苗的時候，需要大量培養的細胞，讓它們染上病原體，經過培養，繁殖出大量病毒，滅活以后做為抗原，注射到人體里。在這個過程中，需要用到Minnebio? 超活核酸酶Ultra-active Nuclease。細胞在培養過程中，殘留下大量DNA是非常危險的，可以滲透到人的細胞里造成各種各樣的遺傳疾病，像是畸形，癌癥等。因此在疫苗的生產過程中必須去除殘留的DNA，各國對此都有嚴格的規定，Minnebio? 超活核酸酶Ultra-active Nuclease是首選核酸酶，因為它廣譜，高效。它比傳統使用的核酸酶DNAase活性高10倍左右，速度快15倍左右。

PhD優勢

高壓均質法是工業上常用的破碎細胞的方法之一，屬于物理破碎細胞的方法。輪狀病毒疫苗原液生產使用均質機處理輪狀病毒收獲液破碎細胞釋放病毒的工藝，該設備在病毒感染細胞收獲后，用于處理感染細胞，使之破碎釋放病毒，用于后續工藝生產。工業上常常用哺乳動物細胞作為病毒培養基質制備輪狀病毒疫苗，常見壓力在0～1000bar左右。

◆破壁能力：高壓設計，輕松上壓；均質效率高，工藝穩定；穩定的破碎能力，更高的胞內物提取；純機械破碎，無化學污染；可放大工業化生產工藝設備

◆控溫效果：獨特溫控設計，內置和外置雙向控溫，確保均質過程及出料溫度可控。

◆活性保障：循環的控溫系統，蛋白活性不失活，細胞破碎后，活性保值高達99%                                                                 

◆無菌保障：金屬結構連接，沒有O型圈或墊片，無死角設計；在線排空結構設計；所有機型均可實現在線清洗（CIP）、循環清洗、拆裝清洗、在位滅菌（SIP）