PhD細胞破壁機-昆蟲細胞

應用背景

又稱昆蟲桿狀病毒系統（Baculovirus expression vector system，BEVS），屬于真核細胞表達系統，更接近哺乳動物細胞的表達系統，但不同于酵母和哺乳動物細胞表達系統。昆蟲表達系統憑借其穩定的實驗體系、高表達水平及翻譯后修飾功能而被普遍認可為一種表達大規模蛋白的強有力的工具,可以提供高活性的重組蛋白，解決在其它體系中無法解決的蛋白活性困難。昆蟲表達系統由于其具有高效的表達能力，通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達外源基因的效率較高。BEVS還可以同時表達多個外源基因，在分泌蛋白生物活性的同時增加產量。因此，BEVS在科研和工業生產中通常應用于大規模重組蛋白的制備。應用的菌株有sf9、sf21、High-5等。

重組蛋白

通過轉座作用將轉移載體中的表達組件定點轉座到能在大腸桿菌中繁殖的桿狀病毒穿梭載體上，通過抗性和藍白斑篩選到重組穿梭質粒，提取穿梭質粒DNA轉染昆蟲細胞后，得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細胞，獲得表達的重組蛋白。

應用優勢

大蛋白正確折疊、具有真核翻譯后修飾、毒性蛋白可被表達。適用于病毒疫苗、信號分子、細胞因子、激酶等。用于生產具有哺乳動物細胞末端唾液酸化修飾的N糖蛋白。

應用方案

通過高壓細胞破碎儀使物料在柱塞作用下進入可調節壓力大小的閥組中經過特定寬度的限流縫隙均質區在均質閥內產生三種效應:空穴效應、撞擊效應、剪切效應的機械作用力從而打破細胞壁的束縛，把蛋白質從組織或細胞中釋放出來盡可能保持原來的天然狀態，不喪失活性，達到高效率破碎細胞的效果。即使用高壓勻漿破碎法采用高壓細胞破碎法，在細胞內產生的壓力效應，從而能夠有效地提取出蛋白質，且處理量大、破碎速度較快。這是一種機械處理細胞，物理抽提方法。

解決方案

首先富集菌體，收集胞內產物的細胞或菌體。然后進行細胞重懸，用適當的緩沖液或培養液將離心或沉降等方法得到的固體（沉淀、細胞、活性物質等等）重新懸浮。其次進行細胞破碎，使產物轉移到液相中。最后收集含生化物質的液相，進行碎片分離，分離除去細胞、菌體、細胞碎片、蛋白質的沉淀物和絮凝體等固體懸浮物，得到上清液或濾液。然后從澄清的濾液中提取胞內產物，從細胞裂解物中獲取目標產物。

技術優勢

均質閥體終身保修                                                                                                                                                                

密封無O型圈或墊片，金屬結構連接                                                                                                                                                  

細胞破碎率≥97%                                                                                                                                

內置和外置雙向控溫                                                                                                                                           

所有機型均可實現SIP和CIP

HMI系統，工控自動化

高效細胞破碎率

減少破碎次數要求

滿足多種細胞破碎要求

更高的蛋白質獲得率

穩定的破碎能力

微通道高壓型結構導致極佳的效果重現性

微通道高壓型結構可線性放大研發工藝結果

技術工藝

破壁工藝：PhD高壓均質處理

溫控要求：10℃以內

破壁難點：菌濃較高，此菌液破壁條件未知

破壁結果：破壁率獲得用戶認可